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快速掌握显微注射仪的使用秘籍!

发布时间:2021-05-19

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  显微注射仪采用显微操作系统(倒置显微镜/体视显微镜+显微操作器)将供体物(基因、细胞核或细胞其他成分)直接注入宿主细胞(去核卵母细胞、胚胎细胞或体外培养的细胞)中,研究供体物的功能或者获得转基因动植物的技术。
 
  显微注射仪的操作过程:
 
  一、针头装液:
 
  1、使用无菌的微量加样器从微注射针头的后部加入0.5~1μl的注射样品。
 
  2、使用玻璃毛细管拉出毛细管针头,里面有与毛细管平行的细丝,有利于液体从后部向针头方向运动。只需在针头后部浸入1mm深度,不需使用手指或其他东西接触,就足以使少量的样品到达针尖部。
 
  二、针头定位:
 
  1、将装液后的针头的游离端安在连接器上,然后旋紧连接器以固定针头,再将其固定到微操作仪的托针管上。
 
  2、把载有待注射细胞的盖玻片转移到里面有缓冲培养基的平皿中,将其放在中央。
 
  3、将培养皿放在显微镜载物台上,尽量将盖玻片上所画圆圈的一个对准光照的中心区,这时光的亮度较好。
 
  4、用低倍物镜对准细胞调焦。
 
  5、将针头推入视野中心,在视野中针头呈阴影状。
 
  6、轻轻的落下针头,直至到达培养基中后停下。
 
  7、通过显微镜观察,移动针头,必要时调整微操作仪,直到针头的阴影在视野的上方。然后确定针头的位置,使其约处在视野中心。
 
  8、轻轻下调针头,直到针头变得清晰一些
 
  9、调到工作放大倍数,调准细胞焦距,找到针尖。
 
  10、如果找不到,重新使用低倍镜,尽量将针头调到视野的中心,重复上述的步骤。
 
  11、小心下调针尖,直到其完全聚焦。
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